氨基酸(AA)檢測試劑盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)檢測原理是在弱酸條件下，氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍(lán)紫色的二酮茚胺(又稱Ruhemans紫)，其吸收峰在波長570nm處，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比，該試劑盒主要用于檢測植物組織、血清、尿液、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。
價(jià)格：￥15.00
規(guī)格：反應(yīng)
貨號：ST1445
品牌：LEAGENE
服務(wù)介紹：
氨基酸(AA)檢測試劑盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)檢測原理是在弱酸條件下，氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍(lán)紫色的二酮茚胺(又稱Ruhemans紫)，其吸收峰在波長570nm處，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比，該試劑盒主要用于檢測植物組織、血清、尿液、食品、藥品等中的總游離氨基酸含量。
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
ST1445 | 氨基酸(AA)檢測試劑盒(茚三酮比色法) | 反應(yīng) | 15元 |
實(shí)驗(yàn)流程:
1、 準(zhǔn)備樣品
①植物樣品：取新鮮植物組織，稱取0.4g，按植物組織：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨，用無氨蒸餾水稀釋至40ml，混勻，
②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，
③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如有必要用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行勻漿，1000g離心5min，留取上清即為氨基酸粗提液
④高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、配制茚三酮顯色液: 取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀釋液，攪拌或超聲處理至完全溶解，即為茚三酮顯色液。
3、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer，按茚三酮顯色液：AA Assay buffer=35：3的比例混合，即為茚三酮工作液
4、配制維生素C工作液: 取出1支維生素C，準(zhǔn)確溶解于30ml無氨蒸餾水，混勻
5、配制系列氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：取出氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(50μg/ml)恢復(fù)至室溫，用無氨蒸餾水將其稀釋至10μg/ml，然后按下表繼續(xù)稀釋：
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(10μg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
無氨蒸餾水 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
氨基酸濃度(μg/ml) | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
6、AA加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入
加入物(ml) | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 |
無氨蒸餾水 | 0.30 | — | — |
系列氨基酸標(biāo)準(zhǔn)(1~5號管) | — | 0.30 | — |
待測樣品 | — | — | 0.30 |
茚三酮工作液 | 0.45 | 0.45 | 0.45 |
維生素C工作液 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
混勻，80℃中加熱20min，冰水迅速冷卻。 | |||
7、AA測定：加60%乙醇2.1ml，混勻；立即以空白調(diào)零，分光光度計(jì)(比色杯光徑1cm)測定標(biāo)準(zhǔn)管、測定管570nm處吸光度(記為A標(biāo)準(zhǔn)、A測定)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。
送樣運(yùn)輸要求：
1、動植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)
準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。
2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。
3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
僅供科研用途，不可用于臨床診斷！
