培養(yǎng)細胞中的細菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學顯微鏡下可見,但支原體污染在光學顯微鏡下不可見,必須通過特定的檢測方法進行檢測。檢測支原體污染的方法有很多種,包括支原體分離培養(yǎng)、支原體特異酶檢測、RT-PCR檢測以及DNA熒光染色檢測。上述檢測方法中,除DNA熒光染色檢測外操作步驟相對比較煩瑣并且所需時間較長。
Leagene 支原體染色檢測試劑盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是經典的利用DNA熒光染色法在培養(yǎng)細胞中原位染色檢測支原體或其它原核生物的試劑盒,主要用于檢測培養(yǎng)細胞中是否存在支原體污染。其原理是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測支原體污染。這種染料會結合到DNA的A-T富集區(qū)域,因為支原體的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細胞經染色后在細胞周圍可看到許多大小均一的藍色熒光小點,即為支原體的DNA染色斑,說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm,最大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后,最大激發(fā)波長為352nm,最大發(fā)射波長為461nm。本試劑盒的熒光染色可快速、有效、高靈敏度地檢測支原體污染。該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。