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上個(gè)世紀(jì)70年代，Kristensopn和Olsson報(bào)道了HRP可神經(jīng)末梢攝取，經(jīng)軸漿逆行運(yùn)輸至神經(jīng)元胞體，經(jīng)組織化學(xué)方法可顯示出神經(jīng)元的輪廓，從而開發(fā)出HRP追蹤神經(jīng)元示蹤技術(shù)，即為HRP法。3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常優(yōu)越的酶免試驗(yàn)顯色劑，能溶解于多種有機(jī)溶劑和雙蒸水中，為穩(wěn)定的無色溶液，與適量過氧化脲或雙氧水與緩沖液混勻后，與過氧化物酶作用產(chǎn)生清晰的藍(lán)色產(chǎn)物，極易觀察，在辣根過氧化物酶的催化下,TMB會產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，該沉淀不溶于水和乙醇，顯色后呈藍(lán)色，可在顯微鏡下觀察。

Leagene 神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)是動物經(jīng)麻醉、注入HRP后，游離或絡(luò)合型的HRP與氧化劑反應(yīng)生成絡(luò)合物，該絡(luò)合物氧化TMB顯色劑，呈藍(lán)色，在顯微鏡下清晰可見，該檢測法較DAB法靈敏。該顯色液僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。